无机分解过柱子履历分享

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柱子可以分为:加压,常压,减压。

压力可以增长淋洗剂的活动速率,增加产品搜集的工夫,但会减低柱子的塔板数。以是其他条件相反的时分,常压柱是服从最高的,但工夫也最长,好比自然化合物的分散,一个柱子几个月也是有的。减压柱可以增加硅胶的利用量,觉得可以节流一半乃至更多,但由于少量的氛围经过硅胶会使溶剂挥发(偶然在柱子表面有水汽固结),以及有些比力易剖析的工具大概得不到,并且还必需同时利用水泵抽气(很大的乐音,并且工夫长)。曩昔已经少量的过

减压柱,对它有比力深沉的情感,但自从实验了加压后,就简直再也没动过减压的动机了。加压柱是一种比力好的办法,与常压柱相似,只不外外加压力使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是紧缩氛围,双连球大概吝啬泵(给鱼缸供气的就行)。分外是在容易剖析的样品的分散中实用。压力不行过大,否则溶剂走的太快就会减低分散结果。团体以为加压柱在平凡的无机化合物的分散中是比力实用的。关于柱子的尺寸,应该是粗长的最好。

 

柱子长了,响应的塔板数就高。柱子粗了,上样后样品的原点就小(反应在柱子上便是样品层比力薄),如许绝对的减小了分散的难度。试想假如柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分散的难度可想而知,我害怕要用很低极性的溶剂渐渐冲了。而假如样品层只要0.5厘米,那么各组分就比力容易失掉完全分散了。固然接纳粗大的柱子要捐躯比力多

的硅胶和溶剂了,不外这些本钱绝对于产品来说大概就不算什么了(有些不环保的说,不外溶剂接纳重蒸后也就减小了局部糜费)。如今见到的柱子径高比一样平常在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,详细的选选择详细剖析。假如所需组分和杂质分的比力开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以罕用硅胶,用小柱子(比方200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子);假如相差不到0.1,就要加大柱子,我以为可以增长柱子的直径,好比用3cm的,也可以减小淋洗剂的极性等等。关于无水无氧柱,实用于对氧,水敏感,易剖析的产品。

 

可以湿柱,也可以干柱。不外在样品之前至多要用溶剂把柱子饱和一次,由于溶剂和硅胶饱和时放出的热量有大概是产品剖析,终究要分散的是敏感的东东,警惕不为过。也是由于分散的工具比力敏感,以是吸收瓶肯定要用可密封的,遵照schlenk操纵。至于是加压、常压、减压,随需而定。由于是schlenk操纵,以是点板是个题目,假如样品是显色的,祝贺了,不必点板,间接看柱子上的色带就行了。假如样品无色,只好预备几十个schlenk瓶,一瓶一瓶的点,不外频频之后就晓得样品在哪,也就可以省些了。像我曩昔过一根无水无氧柱,必要六个schlenk,如今只一个就能把所要的全搜集到。无水无氧柱中用的比力多的是用氧化铝作牢固相。由于硅胶中有少量的羟基暴露在外,

很容易是样品剖析,分外是金属无机化合物和含磷化合物。而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的,选择余地比力大,但比硅胶要贵些。听说有个办法,便是用石英做柱子,然后用HF254做牢固相,如许在柱子表面用紫外灯一

照就晓得产品在那边了,没有验证过。哪位做过可以提出来各人参详参详关于湿法、干法上样。

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湿法省事,一样平常用淋洗剂消融样品,也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等,但溶剂越少越好,否则溶剂就成了淋洗剂了。

许多样品在上柱前是粘乎乎的,一样平常不要紧[bú yào jǐn]。但是有的上样后在硅胶上又会析出,这一样平常都是比力少量的样品才会呈现,是由于硅胶对样品的吸附饱和,而样品自己又是比力好的固体才会产生,这就应该先重结晶,失掉大局部的产品后再柱分,假如不克不及重结晶那就不论它了,间接过便是了,样品随着淋洗剂活动会消融的。

有些样品消融性差,能消融的溶剂又不克不及上柱(好比DMF,DMSO等,会随着溶剂一同走,显色是一个很长的脱尾),这时就必需用干法上柱了。样品和硅胶的量有一种说法是1:1,我以为是越少越好,但要包管在旋干后,不克不及看到分明的固体颗粒(那阐明有的样品没有吸附在硅胶上)。溶剂的选择。

 

固然是最廉价,最宁静,最环保的了。以是大多选用煤油醚,乙酸乙酯。文献中有写用正己烷的,太贵了,除非分外必要不要用否则银子哗哗的,流的比淋洗剂还快,不外由于极性很小,偶然照旧非它不行。乙醚也可以用,但便是容易睡觉,留意坚持苏醒别让溶剂流干了,那样柱子也就不爽了。二氯甲烷也有效的,但要晓得,它和硅胶的吸

附是一个放热历程,以是炎天的时分常常会在柱子里发生气泡,气候冷的时分会好一些。甲醇,听说能消融局部的硅胶,以是产品假如想过元素剖析的话要注意,应该颠末后继处置,好比说重结晶等。其他的溶剂用的绝对较少,要依团体的差别必要选择了。由于某些缘故原由,用到的淋洗剂多是大包装的(廉价嘛),凯发这里是用10升或25升的塑

料桶装的,就要留意这些产业品的纯度是较低的。常常可以从送来的大桶底部瞥见有色的杂质,其他的杂质就可想而知了,以是在比力严厉的柱分时就要对溶剂重蒸。固然过质料时就可以免除这一步了,横竖上面另有提纯的办法。

别的溶剂在过柱子后最好也接纳利用,一方面环保,另一方面也能节流局部经费,缺陷是要斲丧肯定的人工。这里要留意的是,一样平常在过柱同时举行的是减压旋蒸,煤油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的差别会招致极性的变革,一样平常会使得极性变大,在梯度淋洗时比力符合,恰好极性越来越大了。在过完柱子后,溶剂最初接纳要接纳常压,由于

在减压旋蒸时会有局部低沸点的杂质一同出来,常压时就会增加这种征象,假如杂质和你上面要过的样品有反响那就惨了。

关于操纵题目。

 

1 装柱。

柱子上面的活塞肯定不要涂光滑剂,会被淋洗剂带到产品中的,可以接纳四氟节门的。干法和湿法装柱以为没什么区别,只需能把柱子装实就行。装完的柱子应该要过度的严密(太密了淋洗剂走的太慢),肯定要匀称(否则样品就会从一侧斜着上去)。书中写的都是不克不及见到气泡,我以为在大少数状况下有些吝啬泡没太大的影响,一加压气泡就

全上去了。固然假如你装的柱子总是有气泡就阐明必要多实习了。但柱子更隐讳的是开裂,甭管竖的照旧横的,都市影响分散结果,乃至取消!

 

2 加样。

用大批的溶剂溶样品加样,加完后将上面的活塞翻开,待溶剂层降落至石英砂面时,再加大批的低极性溶剂,然后再翻开活塞,云云两三次,一样平常石英砂就根本是白色的了。参加淋洗剂,一开端不要加压,等溶样品的溶剂和样品层有一段间隔(2~4cm就够了),再加压,如许制止了溶剂(如二氯甲烷等)夹带样品疾速下行。

 

3 淋洗剂的选择。

觉得上要使所需点在rf0.2~0.3左右的比力好。不要以为在板上爬高了分的比力开,过柱子就用那种极性,假如rf在0.6,即便相差0.2也不容易在柱子上离开,由于柱子是一个屡次爬板的形态,可以经过公式的比力:0.6/0.8一次的分散度,一定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大。

4 样品的搜集。

用硅胶作牢固相过柱子的原理是一个吸附与解吸的均衡。以是假如样品与硅胶的吸附比力强的话,就不容易流出。如许就会产生,前面的点先出,而后面的点后出。这时可以接纳氧化铝作牢固相。别的,搜集的试管巨细要以样品量而定,分外是小量样品,假如用大试管,大概一根就收到了三个样品,wuwu。假如都用小试管那事情量又太大。

 

5 最初的处置。

柱分后的产品,由于利用了少量的溶剂,此中的杂质也会累积到产品中,以是假如想送剖析,最好用大批的溶剂洗濯一下,由于大局部的杂质是溶在溶剂里的,一洗根本就没了,须要时举行重结晶。

 

我对柱层析的一点见解:
诚如下层的ringydx18所言,硅胶偶然遇到一些无机溶剂是会体积产生变革,但我以为是枯燥的硅胶遇到无机溶剂后,外表的功能产生了改动,有放热的状况产生,我用干法过柱,无论用什么样的活动相,都市有头层活动相所到之处,柱身热的征象,湿法装柱因硅胶事前颠末浸泡,以是有充实的工夫分发失这种热量,发生的大批气泡只是由于操纵者的技能缘故原由所致,好比搅拌不充实,引入了外界的气泡,但干法装柱,样品加好后才加进活动相,柱子中发生的热量会使硅胶漏洞中的一点点氛围收缩,构成较大的,可见的气泡,以是干法装柱的气泡发生征象会比湿法严峻. 另有一种状况,便是柱子装填时分的温度与实践层析历程中的温度差别而构成的。层析时分的室温高于装填温度,则会呈现气泡!

举例阐明:
煤油醚湿法装柱,二氯甲烷消融样品。装柱后煤油醚不要压到硅胶层,留5mm,参加二氯甲烷的样品溶液,如许不会有氛围进入,一样平常不会有裂缝。
万一有气泡或裂缝,用极性最低的溶剂(如乙酸乙酯-煤油醚洗脱,就选煤油醚)多冲洗,将气泡赶出,再梯度淋洗。只需你的柱子够长,一样平常不会有多大影响的。

湿法装柱,硅胶事前可用2~3倍洗脱液(或洗脱液中极性最低的溶剂)浸泡,搅拌或摇匀后装柱(装柱历程中下口翻开)重复用浸泡液过柱,最好沉降一段工夫后再上样,上样时洗脱液肯定不克不及干(分外是易挥发的溶剂),如许不会呈现裂和睦泡
假如柱子上方有大批气泡或裂缝可以用微小竹签放空搅匀,不影响柱层析结果。

硅胶柱呈现断层的缘故原由,我想大概有:

一、洗脱剂没有脱气。分外是室内温度较高时,几相混淆的洗脱剂,假如没有超声脱气,此中消融的氛围渐渐开释出来会使色谱柱断裂。

二、换洗脱剂。有些溶剂硅胶收缩而另有的溶剂使硅胶紧缩,洗脱剂梯度变革太大也会使色谱柱断层。

三、假如楼主用了加压安装如液氮,大概是加液时放气太快,气体从下端口冲进,使硅胶分段。这种状况不留意的话最容易招致硅胶断层。

干法用泵抽,再颠(上面垫快橡胶),再抽,再颠,重复频频,历来没呈现气泡过,颠的好,正面看会呈现一个凸顶,但太实会低落速率。然后参加制过砂的样品,再加点石英沙,加睁开剂即可。一样平常除非特别状况,用200-300目标硅胶。
湿法沉降工夫肯定要充足长,柱子才会实,不会发生气泡或断层。我一样平常都在一个小时以上

呈现气泡很正常,次要是由于你装拄的溶剂和你的洗脱剂纷歧样形成的,由于氛围在差别溶剂中的消融度差别,在两种差别溶剂混淆后消融在溶剂中的氛围会开释出来,形成气泡,这种要素的办理措施是最幸亏装拄的时分,利用和洗脱剂异样比例的混淆溶剂来装,大概装拄溶剂和洗脱剂都事后脱气处置(这种办法不行取,由于超生时分会热,对接纳二氯甲烷或乙醚作洗脱剂的会改动活动相的比例),另有一个罕见的缘故原由是你在活动相里大概利用了氨水,如许也很容易发生气泡。改用三乙胺就可以了。
假如上样后呈现气泡,你用洗耳球小扣柱子,渐渐柱子中的气泡可以在下面扫除,对层析不会有太大的影响大孔吸附树脂在利用前应该在无机溶剂里泡很永劫间,等树脂充实溶胀后才装。你可以先将柱子里多点缀液体,然厥后回振动,直至把气泡所有留在一端,排气后重力沉降就ok了!。


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